系统性红斑狼疮早发动脉粥样硬化临床与基础研究

【摘要】研究背景系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)是一种好发于育龄期女性的慢性炎症性自身免疫性疾病,近30年来研究发现SLE与动脉粥样硬化性疾病关系密切。SLE患者不仅冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronaryatherosclerosisdisease,CAD)患病率明显增加,而且有冠脉病变重、发病年龄提前的特点。Framingham传统危险因素并不能完全解释SLE患者CAD的这些特点,高度提示SLE疾病本身也是CAD的一个独立危险因素。目前国外关于SLE早发CAD的临床和基础研究己迅速开展,而国内在这方面的研究尚处于临床起步阶段。继续深入临床研究,发展基础研究,尤其是建立国内SLE早发动脉粥样硬化(arteryatherosclerosis,AS)小鼠模型进行机制探讨和干预研究尤为必要。研究目的1、探讨CAD传统危险因素和SLE疾病本身在SLE早发CAD中的作用。2、研究SLE患者传统危险因素的患病情况及其血脂的影响因素。3、建立SLE早发AS小鼠模型。4、在SLE早发AS小鼠模型基础上进行AS病变特点的研究和发病机制的探讨。研究方法1、收集11例≦60岁女性SLE合并CAD(冠脉造影证实管腔狭窄≧50%)患者和64例≦60岁的非SLE女性早发CAD患者的临床资料,对二者的传统危险因素和冠脉病变情况进行统计学分析。2、收集符合条件的540例住院SLE患者的临床资料和年龄性别1：2匹配的1080名健康对照者的体检信息,对他们的传统危险因素(高血压、糖尿病、血脂异常、TC升高、TG升高、HDL-C减低、LDL-C升高)患病情况及血脂水平进行比较,并对SLE患者血脂影响因素进行多因素分析。3、采用以下2种方法构建SLE早发AS小鼠模型：(1)方法一：以自发性狼疮鼠模型MRL/lpr鼠为实验组(N=10),以高脂鼠LDLr-/-和普通鼠C57BL/6J为对照组(N均为12)。8周龄时开始高脂饮食,高脂料配方为普通饲料+21%猪油(Wt/Wt)+0.15%(Wt/Wt)胆固醇。高脂喂养14周后称重、处死。观察并记录小鼠皮肤、毛发病变情况及淋巴结和脾脏大小；检测血浆白蛋白、血肌酐、尿素氮、血脂四项(TC、TG、HDL-C及LDL-C)、免疫球蛋白IgG、补体C3、ANA及抗ds-DNA抗体水平：行肾脏组织HE染色、PAS染色、IgG直接免疫荧光及补体C3直接免疫荧光观察肾脏病变情况；用油红O染色检测主动脉根部的动脉粥样硬化病变情况。(2)方法二：以4周龄高脂鼠LDLr-/-+Pristane0.5ml一次性腹腔注射为实验组1(4周龄给药组)(N=10)及8周龄高脂鼠LDLr-/-+Pristane0.5ml一次性腹腔注射为实验组2(8周龄给药组)(N=10),以8周龄高脂鼠LDLr-/-+生理盐水0.5m1一次性腹腔注射为对照组(N=10)。给药当日开始高脂饮食,高脂料配方同前。14周后称重、处死。观察并记录小鼠皮肤、毛发、淋巴结、脾脏情况；检测血浆白蛋白、血肌酐、尿素氮、血脂四项(TC、TG、HDL-C及LDL-C)\免疫球蛋白IgG、补体C3\ANA及抗ds-DNA抗体水平；行肾脏组织HE染色、PAS染色、IgG直接免疫荧光及补体C3直接免疫荧光观察肾脏病变情况；用油红O染色及HE染色检测主动脉根部的动脉粥样硬化病变情况。4、在建模成功的基础上对模型鼠及其对照鼠的主动脉根部组织石蜡切片行masson染色观察纤维含量,行α-SM-actin免疫组化检测平滑肌含量,行CD68单克隆抗体免疫组化检测巨噬细胞含量,行TUNEL染色观察细胞凋亡情况,行免疫球蛋白IgG和补体C3直接免疫荧光检测观察IgG和C3沉积情况。研究结果1、女性SLE早发CAD患者和普通女性早发CAD患者的年龄及所有传统危险因素包括高血压比例、糖尿病比例、高胆固醇血症比例、早发冠心病家族史、早绝经比例及吸烟者比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。SLE早发CAD组与对照组的传统危险因素个数分别为(1.6±0.8)个和(1.8±1.0)个,差异无统计学意义(P>0.05)。两组平均冠脉狭窄支数无明显差异[(2.3±1.1)支和(1.8±0.8)支,P>0.05],单支病变及双支病变的比例也无明显差异(P>0.05)。但SLE早发CAD组三支病变比例明显高于对照组[(7/11)比(17/64)；P=0.017)]。2、SLE患者高血压、糖尿病、血脂异常、总胆固醇(TC)升高、甘油三酯(TG)升高、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)减低及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高比例均明显高于对照组(P值均为0.000),SLE组TC、TG、LDL-C水平明显高于对照组(P=0.000),HDL-C水平明显低于对照组(P=0.000)。多元线性回归分析显示TC和LDL-C水平与狼疮肾炎、激素治疗、补体C4水平24小时尿蛋白量正相关(P<0.05),与血浆白蛋白(Alb)水平、高敏C反应蛋白(hsCRP)水平负相关(P<0.05)；TG水平与女性、狼疮肾炎及24小时尿蛋白量呈正相关(P<0.05),与年龄和Alb水平负相关(P<0.05)；HDL-C水平与年龄、狼疮肾炎、激素治疗、血脂测定前30天激素总量及补体C3水平呈正相关(P<0.05),与hsCRP水平负相关(P<0.05)。血脂水平与SLE病程、病情活动、激素治疗时间、血脂测定前激素日剂量、羟氯喹(HCQ)治疗、谷丙转氨酶(ALT)水平、血清肌酐(Cr)水平及红细胞沉降率(ESR)无明显相关(P>0.05)。3、MRL/1pr狼疮鼠有着类似人类SLE的表现特征,包括脱毛、皮损、淋巴结肿大、脾脏增大；补体C3减低、免疫球蛋白IgG增高、ANA及抗ds-DNA抗体滴度明显增高；肾小球细胞增多、基膜增厚、系膜基质增多、炎性细胞浸润、免疫球蛋白IgG和补体C3肾小球沉积。LDLr-/-鼠和C57BL/6J鼠无上述表现。4、LDLr-/-鼠高脂饮食14周可以出现明显的高脂血症和AS病变,但MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6J普通鼠均未能出现明显的血脂水平的增高和AS病变。MRL/lpr狼疮鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C水平均低于C57BL/6J普通鼠,以TG和LDL-C水平最为明显。5、无论4周龄还是8周龄LDL-/-鼠,经Pristane0.5ml一次性腹腔注射及高脂喂养14周均可以出现类似MRL/lpr鼠的肾脏病变；4周龄给药小鼠还出现了脱毛、皮损、淋巴结肿大、脾脏增大、免疫球蛋白IgG水平增高,8周龄给药小鼠则无上述表现。4周龄给药小鼠和8周龄给药小鼠均未出现补体C3水平的明显减低和自身抗体(ANA、抗ds-DNA抗体)滴度的明显增高。6、对照组(LDLr-/-鼠+生理盐水0.5m1一次性腹腔注射+高脂喂养14周)未表现出SLE样的表型、血清学改变、免疫学异常及肾脏病变。7、Pristane注射组和对照组在高脂喂养14周后均出现了明显的高脂血症和AS病变。血脂水平以8周龄给药组小鼠最高,对照组次之,4周龄给药组小鼠最低。AS病变以4周龄给药组小鼠最重,8周龄给药组次之,对照组最轻。8、Pristane注射组小鼠AS病变以纤维增生为主,病变部位凋亡细胞多,巨噬细胞及平滑肌细胞明显减少。给药组和对照组斑块表面均可检测到免疫球蛋白IgG沉积,但给药组斑块部位未检测到明显的补体C3沉积,而对照组斑块表面可检测到补体C3沉积。结论1、传统危险因素同样是SLE患者发生CAD的重要因素,SLE的免疫炎症作用可能倾向于使AS病变更为广泛和严重。2、住院SLE患者心血管疾病代谢性传统危险因素患病率明显增加,尤其是血脂异常。SLE患者血脂异常与激素使用、肾脏病变及免疫炎症明显相关。3、高脂血症是AS发生、发展的重要条件,单单SLE疾病本身可能并不能产生明显的AS病变。4、除却激素、肾炎的作用,SLE疾病本身可能倾向于使血脂水平减低。5、Pristane可以诱导LDLr-/-鼠发生狼疮,幼年鼠给药会明显加速SLE病变的出现。6、4周龄LDLr-/-鼠一次性腹腔注射0.5mlPristane并予以高脂喂养14周可以成功建立SLE早发AS小鼠模型,观察时间长,效果可能会更明显。7、SLE基础上的AS病变程度更重,血管病变以纤维增生为主,斑块多为稳定型斑块。8、SLE的AS病变血管壁细胞凋亡和免疫球蛋白IgG沉积增加,而巨噬细胞和补体C3减少,这可能是SLE的AS发病机制之一。
【作者】刘丽；
【导师】陈连凤；张抒扬；
【作者基本信息】北京协和医学院，心血管内科学，2014，博士
【关键词】系统性红斑狼疮；动脉粥样硬化；危险因素；Pristane；动物模型；

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